Anales de la Fundación Alberto J. Roemmers | 09 SEP 20

Inducción y caracterización de fenotipo colesterogénico mediante la tecnología de CRISPRon.

Tanto el colesterol como elevados niveles de uno de sus receptores (LDLR) se consideran factores de riesgo, promotores del crecimiento tumoral
Autor/a: Maria Paula Marks, Luciano Vellón, Juan Carlos Calvo, Sabrina Fletcher, Virginia Novaro, Jimena Rodriguez. 
INDICE:  1. Texto principal Parte (I) | 2. Texto principal Parte (II) | 3. Referencias bibliográficas
Texto principal Parte (I)

Resumen

La síntesis de novo de colesterol y su enzima limitante, hidroximetilglutaril-coenzima A reductasa (HMGCR), es crítica para la regulación de la proliferación y la supervivencia celular en cáncer.

El objetivo general del presente trabajo es estudiar el papel de la vía del colesterol en la adquisición de propiedades de células madre en modelos de cáncer de mama (CM). Con ese propósito, se desarrolló un modelo de sobreexpresión de HMGCR en la línea celular MCF-7 utilizando un sistema CRISPR activador (CRISPRon).

La generación de dicho sistema comprendió las siguientes etapas:

1. Diseño y síntesis de las sondas (sgRNAs)

2. Clonación de las sondas

3. Transformación de bacterias con los plásmidos clonados

4. Verificación de dichas construcciones por secuenciación

5. Transfección de líneas celulares

6. Caracterización del sistema.

La expresión de HMGCR aumentó significativamente en las células MCF-7/CR en comparación al control de transfección (MCF-7/TC), tanto a nivel transcripcional como proteico, y se observan niveles similares a los detectados en otros modelos de células madre (normales y tumorales).

El fenotipo HMGCRon se asoció a un incremento de los niveles de los marcadores de pluripotencia Nanog y Sox2, un  aumento en la población CD44+/CD24- y CD133+ y un aumento en la frecuencia de formación de mamoesferas, características asociadas a células madre tumorales (CMTs) en CM. A continuación, se evaluó la viabilidad de estas células en respuesta al tratamiento con simvastatina (SIM) y lovastatina (Lova).

Se encontró que las células MCF-7/CR muestran mayor sensibilidad a SIM que la línea control MCF-7/TC. Estos datos sugieren que la expresión de HMGCR está asociada a características de CMTs y determina, al menos en parte, la sensibilidad a estatinas, sentando las bases para estudios posteriores orientados a una terapéutica anti-colesterol específica para el compartimiento de células madre en CM.

 

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