La fosforilación-defosforilación de residuos de serina y treonina de la calponina, se sabe que modula in vitro su interacción con F-actin, y se piensa que regula varios procesos biológicos en las células, involucrando ambas isoformas de la calponina. Aquí identificamos, por primera vez, a la calponina h3 fosforilada en el residuo tirosina dentro de células COS 7, antes y después de su transfección con el vector pSV que contiene ADNc codificante, relacionado al Src, tirosina quinasa, Fyn.

Luego describimos la fosforilación de tirosina específica in vitro, de la calponina h1 y h3 por esta quinasa. Los residuos de tirosina marcados (32)P, se monitorearon por autoradiografía combinada, inmunoblot con un anticuerpo monoclonal específico de fosfotirosina y por defosforilación con la fosfatasa de la proteína específica de fosfotirosina, YOP. Los análisis de phosphorImager mostraron la incorporación de, como máximo, 1,4 y 2,0 mol de (32)P por mol de calponina h3 y h1, respectivamente.

Como resultado, 75% y 68%, respectivamente, de la unión a F-actin se perdieron por las calponinas fosforiladas. Además, F-actin, agregó en ambas calponinas, un exceso molar plegado de 2 ó 10, que no protegieron, sino que aumentaron, la extensión de la marcación de (32)P. El análisis estructural de los fosfopéptidos de tripsina de cada colponina (32)P-marcada, reveló a un solo y mayor péptido (32)P en la calponina h3, con Tyr261 como el sitio de la fosforilación.

La Tyr261 también fue fosforilada en la calponina h1, junto con la Tyr182. Colectivamente, los datos apuntan a la potencial complicación, por lo menos en las células vivas no musculares, de la proteína de tirosina quinasa y el Tyr261 conservado, localizadas en el tercer dominio de la molécula de calponina, en un nuevo nivel de regulación de la interacción actin-calponina.