El factor estimulante de colonias macrófago/granulocito (GM-CSF), es una de las numerosas glicoproteínas  producidas naturalmente que regulan la producción, migración y función de los leucocitos. Fue producido en diferentes tipos de células, con diferentes propiedades que dependen del proceso de producción utilizado.

El objetivo de este trabajo fue caracterizar el GM-CFS recombinante humano obtenido de una línea celular de ovario de hámster chino modificada cultivado en suspensión y como cultivo adherente para la identificación de dominios de glicosilación y la definición de la mitad glicosídica, incluyendo del grado de ocupación de sitios. Ambas preparaciones revelaron tamaños heterogéneos en la SDS/PAGE con bandas múltiples que contienen formas de glicoproteína con uno o dos sitios de N-glicosilación ocupados.  Las formas menores de bajo peso molecular carecían completamente de N-oligosacáridos, pero contenían 1-3 O-glicanos.

Se detectaron doce isoformas cargadas de distinta manera en los geles isoeléctricos de enfoque. Se detectaron al menos 16 glicoformas, que se diferenciaban por el número de unidades Hex-HexNAc (Dm 365 Da) en el espectro MALDI-TOF MS de los GM-CSFs desialilados. Los análisis de MALDI-TOF MS y HPAEC-PAD indicaron la presencia predominante de cadenas tri y tetracatenarias de N-oligosacáridos, con y sin unidades de repetición N-acetillactosamina y un 10% de oligosacáridos bicatenarios, la totalidad de los cuales contenían más del 90% de alfa 1-6-fucosa proximal. Resultó que los patrones del oligosacárido de ambas preparaciones de GM-CSF eran muy similares.

Más del 90% de los residuos de la galactosa terminal se los encontró en a 2-3 sialiliados con NeuNAc (93%) o NeuNGc (7%). Se analizó el sitio específico de la glicosilación mediante ionización MS por electrospray y se halló que en la forma del GM-CSF monoglicosilado, más del 90% de la Asn37 estaba ocupado por N-glicanos. La O-glicosilación en la terminación N del polipéptido se detectó en Ser7 y Ser9 o Thr10 predominantemente, en la forma  glicoproteíca doblemente O-glicosilada.

En las moléculas de GM-CSF de triple modificación, Ser5 fue O- glicosilado adicionalmente. La diferencia más significativa entre ambas preparaciones se halló en el espectro MALDI de las glicoproteínas desialiladas, que revelaron una proporción mayor de formas con un único sitio de N-glicosilación ocupado en la preparación derivada del cultivo en suspensión.

Los análisis ESI-MS y MALDI-MS de los péptidos fragmentados endoproteolíticamente así como los MALDI-TOF MS de las glicoproteínas intactas mostraron la integridad de las terminaciones N- y C- de las preparacio