El cáncer de cuello es el segundo cáncer más frecuente en las mujeres y es el más frecuente en los países en vías de desarrollo donde ocurren el 80 por ciento de los casos. Ciertos tipos de papiloma virus humano (HPV) son la causa principal de cáncer cervical invasor y de la neoplasia intraepitelial cervical (CIN). Se han logrado identificar más de 80 tipos de HPV de los cuales 40 pueden infectar el tracto genital.

El HPV genital ha sido subdividido en HPV de bajo y alto riesgo pero no hay un consenso sobre muchos tipos de HPV con una baja prevalencia de acuerdo al riesgo. Los de alto riesgo se consideran que son entre 13 y 19 pero sólo 11 han podido clasificarse (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56 y 58). Por eso, se necesitan criterios claros para clasificar a los distintos tipos de HPV que deben basarse en estudios epidemiológicos moleculares y en el potencial oncogénico del virus.

En 1995, la Agencia Internacional para la Investigación del Cáncer (International Agency for Research on Cancer, IARC) concluyó que cuatro estudios caso-control eran suficientes para clasificar al HPV 16 y 18 como carcinógenos pero no para otros tipos. Desde entonces se han desarrollado otros trabajos con el mismo protocolo y el mismo método de detección del ADN del HPV. Este trabajo muestra los resultados de 11 estudios que serán útiles para la elaboración de vacunas y para programas de screening basados en el testeo del HPV.

Método:

Desde 1985 a 1997, se realizaron 11 trabajos en nueve países con una variada gama en la incidencia del cáncer cervical. Nueve trabajos fueron sobre cáncer cervical invasor (CCI) y dos incluyeron casos de carcinoma in situ (CIS). Los trabajos incluidos en esta investigación se realizaron en ocho países que tienen distinta incidencia de cáncer cervical. Se incluyeron poblaciones de alto riesgo de África (Marruecos y Malí) y Sudamérica (Brasil, Perú, Paraguay y Colombia); de riesgo intermedio en Asia (Tailandia y Filipinas) y de bajo riesgo en España. En España y Colombia se realizaron otros trabajos sobre CIS de manera simultánea con el de CCI. Estos trabajos también fueron incluidos en el análisis porque se sabe que el CIS es un precursor inmediato del CCI y porque no se ha detectado por el momento ninguna diferencia en los factores de riesgo entre el CIS y el CCI. Todos los protocolos fueron aprobados por el IARC y el comité de investigación y ética de cada país involucrado.

Recolección de datos y muestras: Las mujeres fueron entrevistadas por gente entrenada del hospital utilizando un cuestionario para detectar factores de riesgo. Se les realizó un examen ginecológico y se obtuvieron dos muestras de cuello para el estudio citológico y para la detección del ADN del HPV. Se tomó una biopsia del tumor en la mayoría de las pacientes.

Detección del ADN del HPV y agrupación filogenética de los tipos de HPV: Se obtuvieron las muestras del Papanicolaou con una espátula de madera. La hibridización del ADN del HPV se realizó por PCR a través de la amplificación de un pequeño fragmento del gen Ll. La calidad del ADN se estableció con primers de ß-globina. Se utilizaron primers GP5+/16+ en todos los estudios excepto en los de Colombia y España donde se usaron los primers MY09 y MY11. Los productos de PCR fueron testeados para HPV con la hibridización del Southern blot con un cóctel de sondas HPV-específicas. Para el genotipo viral, los productos de PCR se hibridizaron con sondas de oligonucleótidos para el tipo de HPV 34 (HPV 6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 34, 35, 39, 40, 42, 43, 44, 45, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 61, 66, 68, 70, 72, 73, IS39, MM4, MM7, CP6108 y CP8304).

Aquellas muestras que fueron positivas para el ADN del HPV pero que no hubo hibridización con ninguna de estas 33 sondas, se las llamó HPVX. En un segundo paso, se utilizaron primers E7 para 14 tipos de HPV de alto riesgo (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 y 68) para la reamplificación de las muestras positivas para ß-globina clasificadas HPVX o negativas para el ADN del HPV tanto en los casos como en los controles.

Se tomaron las precauciones para evitar los falsos positivos. Todas las PCR fueron realizadas por un investigador que desconocía si se trataba de un caso o de un control.
Para la agrupación filogenética de los tipos de HPV se utilizó el árbol de 106 tipos de papiloma virus basándose en la región informativa en el gen L1. Los 12 tipos de HPV que se clasificaron filogenéticamente como de alto riesgo en base a una alineación de secuencias junto con los tipos que están relacionados con esos 12 tipos, fueron clasificados como de alto riesgo en este estudio. De esta manera, de los 33 tipos de HPV que fueron evaluados, se clasificaron filogenéticamente de alto riesgo a los tipos 16, 31, 33, 35, 52 y 58 (todos pertenecen al grupo A9); 18, 39, 45, 59, 68 y 70 (grupo A7); 26, 51 y 82 (grupo A5) y los tipo 53, 56, y 66 (grupo A6). Mientras que fueron clasificados de bajo riesgo los tipos 6, 11 y 44 (grupo A10); 34 y 73 (grupo A11); 40 y 43 (grupo A8); 42 (grupo A1); 61, 72, 81, 83, 84 y CP6108 (grupo A3); y 57 (grupo A4).

Análisis estadístico: Se utilizaron modelos de regresión lógica y la asociación de la exposición se estableció con tasas de probabilidad. El riesgo relativo y el intervalo de confianza (IC) se calcularon con respecto a la edad ajustándose la variable de la edad estableciendo grupos (menores de 40, 40 a 49, 50 a 59 y mayores de 59 años). Dado el bajo número de casos en Malí, se utilizaron dos categorías ( 45 y >45 años). Se determinaron los datos de los CIS y CCI por separado.

Artículo comentado por la Dra. Marisa Geller, editora responsable de IntraMed en la especialidad de Tocoginecología.