Niveles salivales de HNP 1-3 se relacionan con la actividad de las ulceras orales

Las úlceras orales son la característica clínica más común y la presentación clínica inicial entre varias manifestaciones clínicas en BD. En la etiopatogénesis de BD están implicados agentes infecciosos que incluyen Estreptococos sp, herpes simple, factores genéticos, hormonas y desregulación inmune.  Se ha sugerido que varias funciones de los leucocitos polimorfonucleares (neutrófilos) como el incremento de la actividad quimiotáxica, sobreproducción de radicales de oxígeno, y actividad enzimática anormal, causan daño tisular ocasionado foliculitis pustulosa, patergia e hipopion en BD.

En el sistema inmune, los neutrófilos defienden contra los agentes infecciosos con la actividad quimiotáxica oxidativa y no-oxidativa.  Los péptidos salivales antimicrobianos (AMPs) se liberan de las membranas de la superficie epitelial oral como así también los neutrófilos migran dentro de la cavidad oral vía fluído del surco gingival.  Debido a que son antibióticos naturales con actividad antimicrobiana de amplio espectro, juegan un rol activo y crucial en proteger el ambiente oral y también estimulan el sistema inmune adquirido y previenen la formación del biofilm.  Los péptidos neutrofílicos humanos (HNP) 1-3 y las a-defensinas se expresan en los neutrófilos y en las células de los conductos salivales; participan de la muerte microbiana no oxidativa en el medio oral.

Aunque el medio oral y las funciones neutrofílicas pueden ser una parte de la etiología de BD, se desconoce si los niveles de HNP 1-3 derivados de los neutrófilos se relacionan con el curso de la enfermedad.  Por lo tanto el objetivo de este estudio fue examinar la relación entre los niveles salivales de HNP 1-3 y la actividad de las úlceras orales en pacientes con BD.

En éste estudio, se incluyeron 95 pacientes con BD (F/M: 39/56; edad media: 38.7+- 11.9 años), 53 pacientes con enfermedad dentaria (grupo control: F/M: 20/33; edad media: 33.7+-10.7 años), y 53 controles sanos (F/M: 23/30; edad media: 35.2 +-10.1 años).

Las características clínicas de los pacientes con BD eran úlceras orales, genitales. Lesiones cutáneas en 100% (n=95), artritis en 33.7% (n=33), enfermedad ocular en 17.9% (n=17), enfermedad vascular en 11.6% (n=11), compromiso neurológico en 2.1% (n=2) y compromiso gastrointestinal en 1.1% (n=1).
La reacción de patergia positiva estaba presente en el 66.3% (n=63).

El número y duración de las úlceras orales se contabilizaron en el mes previo.  Los pacientes se trataron con colchicina (n=70, 72.3%, 1-1.5 mg/día) e inmunosupresores (n=25, 26.3%) en el estudio.

El grupo control comprendía los pacientes con patología dental, pulpitis aguda irreversible, para tratamiento de conductos (n=32) y pericoronitis aguda para tratamiento con remoción del tercer molar (n=21).  La pericoronitis es una infección en la gingiva de un tercer molar, mientras que la pulpitis irreversible es la infección de la pulpa y tejido periapical del ápice de un diente.  Debido a que no hubo diferencia significativa en los niveles salivales de HNP 1-3, los dos grupos de pacientes se combinaron como grupos de pacientes dentarios para el análisis.
Se recolectaron muestras de saliva sin estimulación de pacientes y controles en 15 minutos entre las 9 y 12 de la mañana por el ritmo circadiano de secreción de la saliva. Luego se congelaba a -80ºC.  Se evitaba comer, beber y masticar o lavarse los dientes 60 minutos antes de tomar la muestra.  Las muestras de saliva se centrifugaban a 800 g por 10 minutos y se recolectaba los sobrenadantes.  Se medían los niveles salivales HNP 1-3 por ELISA.  Este método mide HNP 1-3, ya que el anticuerpo no distingue entre HNP 1, 2, y 3.

Los niveles salivales de HNP 1-3 en pacientes con BD estaban incrementados significativamente comparado con los pacientes controles.

No se observaron diferencias significativas en los niveles salivales HNP 1-3 acorde al sexo en BD y grupos controles.

Las úlceras activas orales estaban presentes en el 71.5% (n=68) en el grupo BD.  Aunque se encontraron niveles HNP 1-3 menores en pacientes con úlceras activas orales comparado con las inactivas, no se encontraron diferencias significativas.  Cuando se investigan la relación entre los niveles salivales HNP 1-3 y la actividad de las úlceras orales los niveles HNP 1-3 eran altamente variable en pacientes con BD.  En el grupo con niveles bajos de HNP 1 (menor o igual a 1000 lg/ml y 1500 lg/ml), la presencia de úlceras activas orales (100%, n=14 y 94.7%, n=18, respectivamente) era mayor que en los otros grupos (66.7%, n=54 y 65.8%, n=50, respectivamente) en BD. 

Los péptidos antimicrobianos salivales (AMPs) son barreras químicas para proteger al ambiente oral en respuestas inmunes innatas.  Entre los AMPs, HNP 1-3, las a-defensinas, se expresan en neutrófilos y células ductales de la glándula submandibular y participan en la muerte microbiana no oxidativa.

Los niveles salivales de HNP 1-3 en pacientes con BD fueron mayores que en los controles sanos y controles con enfermedad.  Debido a las funciones de los neutrófilos, como quimiotaxis, fagocitosis incrementada en los pacientes con BD, los neutrófilos super reactivos han sugerido un factor de riesgo para daño de tejidos en BD.  Debido a que los neutrófilos migran a través del epitelio de unión alrededor de los dientes en el ambiente oral, puede predecirse un incremento en los niveles salivales de HNP 1-3 por los neutrófilos activados con BD.

Sólo un número limitado de estudios han evaluado las defensinas en BD.  Se observa incremento de HNP 1-3 en células, la mayoría neutrófilos y CD 56+ en células NK en el corion, luego de reacciones de patergia cuando se examinan las biopsias de piel de antebrazos.  Las a- defensinas pueden estar entre las moléculas efectoras mayores en lesiones de BD espontáneas o inducidas y pueden liberarse en cantidades patológicas de granulocitos infiltrantes y de células NK en respuestas a señales de estrés.

En este estudio un punto interesante fueron los niveles bajos de HNP 1-3 en pacientes dentales con infección oral activa.  Además, los pacientes con pulpitis irreversible y pericoronitis presentaron niveles similares de HNP 1-3.  Como los niveles de neutrófilos pueden incrementarse en infecciones agudas, los incrementos transitorios en el sitio de inflamación sirven como defensas de primera línea del huésped contra la infección por el sistema inmune innato.

Los mecanismos oxidativos y no oxidativos de estos fagocitos degradan microorganismos.  Los AMPs tienen roles en los sistemas de defensa no oxidativos de los neutrófilos.  La saliva puede jugar una parte importante en el mantenimiento de la salud oral y como primera línea de defensa contra las infecciones.  Por lo tanto, una disminución en los niveles HNP 1-3 codificada por genes podría predisponer a la infección oral. 

Relacionado con su rol de infección, los neutrófilos pueden ser importantes para proteger de las caries en el microambiente oral.  Los niveles salivales de HNP 1-3 se encuentran elevados en niños sin caries comparados con el grupo con caries.  Los niveles de HNP 1 en saliva son mayores en el grupo de pacientes con infección oral por inflamación perimandibular, perimaxilar, perocoronitis, sialadenitis y osteomelitis comparado con los controles sanos. 

Debido a que los niveles salivales de HNP 1-3 varían en pacientes con BD, se evaluaron pacientes con BD con y sin úlceras orales activas.  Este tipo de evaluación se llevó a cabo en la experiencia con caries y niveles salivales HNP 1-3 en niños en estudios previos.

Con este análisis, los niveles salivales de HNP 1-3 tendieron a ser menores en úlceras activas orales.  La flora microbiana oral y el cuidado pobre de salud oral están implicados en la etiopatogénesis en BD.  El estreptococo podría penetrar dentro de la mucosa oral, y desencadenar la producción de citoquinas proinflamatorias, y ocasiona la inflamación mucosa y sistémica.

Similar al grupo de pacientes dentarios, la principal pregunta fue si la actividad antimicrobial puede ser insuficiente para proteger la mucosa oral en pacientes con o sin BD.

Las úlceras orales podrían ocurrir como respuesta local seguida a estimulación con microorganismos en úlceras orales de BD.  La falta de coordinación y regulación de la respuesta innata inmune puede haber ocurrido con niveles bajos de HNP 1-3 en BD.

Cuando se examinan los niveles HNP 1 en enfermedades orales como el líquen plano oral, leucoplasia y glositis asociada a déficit de hierro, se encontró que el HNP 1 salival, fue mayor en pacientes que en individuos sanos.

Los niveles de HNP 1-3 en fluído sinovial está correlacionado con la erosión articular en artritis reumatoidea.  Se sugiere que la respuesta local HNP se correlaciona con el recuento de glóbulos blancos y con la regulación del curso destructivo de la artritis reumatoidea.  Debido a que el patrón de la enfermedad es diferente en BD comparado con estas enfermedades, se esperan resultados controvertidos.

Los niveles salivales de HNP 1-3 fueron mayores en BD al compararlo con los controles.  Este resultado concuerda con las observaciones previas con respecto a las funciones de los neutrófilos aumentada en BD.  Los niveles bajos de HNP 1-3 pueden relacionarse a actividad ulcerosa oral en BD.  Además, una disminución en los niveles salivales de HNP 1-3 podría ser un factor biológico de predisposición a las infecciones orales.  Se necesitan de futuros estudios para entender mejor el rol de éstos AMPs en BD e infecciones orales.

Tabla 1:  Niveles de péptidos salivales humanos 1-3 en enfermedad de Behcet y en controles sanos.